Estreptococo patógeno: STREPTOCOCCUS PYOGENES

Streptococcus pyogenes es una bacteria Gram-positiva que crece en largas cadenas.¹ S. pyogenes muestra el Antígeno grupo A de la clasificación de Lancefield en sus paredes celulares y hace hemólisis del tipo beta-hemólisis cuando se cultiva en agar sangre. S. pyogenes típicamente produce grandes zonas (halo) de beta-hemólisis, con completa rotura de eritrocitos y la recuperación de hemoglobina Por todo ello se le conoce también por estreptococo beta-hemolítico del grupo A(o sus siglas en inglés, GAS). Puede ser encapsulado por lo que es resistente a la fagocitosis. Posee numerosas exotoxinas. Se trata de un microorganismo no esporulado (no produce esporas).

(Foto Microscopica de Streptococcus pyogenes con tinción de gram)

MEDIOS DIFERENCIALES DE CULTIVO

(Agar Sangre con Hemolisis Beta de Streptococcus pyogenes)

Los aislamientos de S. Pyogenes son cocos esféricos de 0,5 a 1,0 mm que forman cadenas cortas en las muestras clínicas y cadenas mas largas cuando crecen en medio de cultivo. El crecimiento es óptimo en un medio de agar sangre enriquecido, pero se inhibe si el medio contiene una concentración elevada de glucosa. Después de 24 horas de incubación se observan colonias blancas de 1 a 2 mm con grandes zonas de Beta hemólisis.

PRUEBAS BIOQUÍMICAS DIFERENCIALES

Dentro de las pruebas bioquímicas para la identificación, la primera, luego de determinar 

que se trata de cocos Gram positivos, es la prueba de la catalasa.

Luego de determinar que se trata de cocos Gram positivos, catalasa negativos, debemos 

observar el efecto que producen las colonias de la cepa en estudio sobre placas de agar sangre 

ovina al 5% (tipo de hemólisis). Así podemos clasificar este grupo de gérmenes en:

• beta-hemolíticos: son aquellos que producen una hemólisis total de los glóbulos rojos, 

observándose como un halo transparente alrededor de las colonias.

• alfa-hemolíticos: son aquellos que producen hemólisis parcial, la cual se observa como 

un halo con tonalidad verdosa alrededor de las colonias.

• gamma-hemolíticos: son aquellos que no producen hemólisis sobre el agar sangre.

Estafilococo Patogeno: STAPHYLOCOCCUS AUREUS

El Staphylococcus aureus, conocido comúnmente como estafilococo áureo o dorado, es una bacteria anaerobia facultativa grampositiva productora de coagulasa y catalasa que se encuentra ampliamente distribuida por todo el mundo. 


El S. aureus es un coco inmóvil, de 0.8 a 1 micrómetro de diámetro, que se divide en tres planos para formar grupos de células irregulares semejantes a racimos de uvas. En extendidos de pus los cocos aparecen solos, en pares, en racimos o en cadenas cortas. Los racimos irregulares son característicos de extendidos tomados de cultivos que se desarrollan en medios sólidos, mientras que en otros cultivos son frecuentes las formas de diplococos y en cadenas cortas. Unas pocas cepas producen una cápsula o capa de baba que incrementa la virulencia del microorganismo. El S. aureus es un microorganismo grampositivo pero las celulas viejas y los microorganismos fagocitados se tiñen como gramnegativos.

(Foto microscopica de Staphylococcus aureus  con tinción de Gram)

MEDIOS DIFERENCIALES DE CULTIVO

(Agar Sangre con colonias de Staphylococcus aureus)

(Agar Sal y Manitol con colonias de Staphylococcus aureus)

PRUEBAS BIOQUÍMICAS DIFERENCIALES

Prueba del Manitol

Sirve para detectar si los gérmenes son capaces de fermentar el manitol liberando productos ácidos que serán detectados gracias al indicador rojo de fenol que cambiará a color amarillo. Para esta prueba el medio manitol movilidad incluye 7,5 g/l de D-Manita. Bacterias manitol (-) son, dentro de las enterobacterias,Proteus mirabilis, Proteus vulgaris y Shigella dysenteriae. Entre las bacterias de importancia clínica, la prueba del manitol sirve para diferenciar Staphylococcus aureus (+) de Staphylococcus epidermidis (-).


Prueba de la Catalasa

Se utiliza para comprobar la presencia del enzima catalasa que se encuentra el la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La principal excepción es Streptococcus.

Originariamente, esta prueba era utilizada para diferenciar entre los siguientes géneros:

• Streptococcus (-) de Micrococcus (+) y/o Staphylococcus (+).
• Bacillus (+) de Clostridium (-).
• Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de C.pyogenes y C.haemolyticum, ambos -) deErysipelothrix (-)

Una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente puede hacerse siguiendo dos técnicas:

1. Método del portaobjetos (recomendado):

• Con el asa de siembra recoger el centro de una colonia pura de 18-24 horas y colocar sobre un portaobjetos limpio de vidrio.
• Agregar con gotero o pipeta Pasteur una gota de H₂O₂ al 30% sobre el microorganismo sin mezclarlo con el cultivo.
• Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).
• Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante.
• Si se invierte el orden del método (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos.

2. Método del tubo de ensayo:

• Agregar 1ml de H₂O₂ al 3% directamente a un cultivo puro de agar en slant densamente inoculado.
• Observar la formación inmediata de burbujas (resultado positivo).